River City Girls met en scène Kyoko et Misako, deux lycéennes endurcies qui doivent se frayer un chemin à travers les six quartiers de River City pour sauver leurs petits amis kidnappés, Kunio et Riki, figures emblématiques de la série. En chemin, elles utiliseront tout un arsenal de combos, de contre-attaques, de projections et d'attaques spéciales ; affronteront toute une série d'ennemis ; accepteront de nombreuses quêtes secondaires ; gagneront des niveaux grâce à des points d'expérience ; interagiront avec des PNJ (dont des invités spéciaux issus des précédents jeux River City) ; et achèteront divers objets, de la nourriture et de l'équipement pour améliorer leurs statistiques et débloquer de nouvelles capacités. Les filles peuvent même manier des armes et recruter des ennemis vaincus pour qu'ils se joignent à elles au combat !